《表1 PCR引物序列:鼠诺如病毒在新生小鼠坏死性小肠结肠炎模型中的保护作用》

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《鼠诺如病毒在新生小鼠坏死性小肠结肠炎模型中的保护作用》


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从-80℃冰箱取出冻存的回盲部肠组织,按照组织RNA提取试剂盒步骤提取肠组织总RNA。从液氮罐中取出保存的肠道固有层淋巴细胞,按照细胞RNA提取试剂盒步骤提取肠道固有层淋巴细胞的总RNA。NANODROP 2000测定每个样本RNA浓度,按照逆转录试剂盒步骤将RNA逆转率为c DNA,然后以c DNA为模板,在Bio-Rad CFX90Real-Time PCR仪上进行TLR-3、MDA-5、IL-6、IL-10、IL-1β、IL-22扩增。Real-Time PCR反应条件:95℃预变性30 s,95℃变性5 s,56.2℃退火5 s,65℃延伸5 s,共39个循环。目的基因相对表达量采用2-ΔΔCt(ΔCt=目的基因Ct值-内参Ct值)进行分析,以GAPDH为内参。引物序列见表1。