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第1章聚丙烯酰胺凝胶电泳导论1

引言1

聚丙烯酰胺凝胶的性质2

化学结构2

聚合催化剂3

有效孔径3

实验方法3

柱胶和板胶4

解离或非解离缓冲系统5

连续或不连续（多相）缓冲系统5

pH选择8

聚合催化剂的选择9

凝胶浓度的选择9

分子量测定11

仪器14

成胶装置和贮液槽14

电泳所需要的其它装置16

聚丙烯酰胺凝胶的制备和电泳18

试剂18

贮备液19

凝胶混合液的制备20

柱胶的制备21

板胶的制备24

样品制备26

加样和电泳29

电泳后的凝胶分析30

凝胶的取出31

蛋白质的染色及定量32

放射性蛋白质的检定36

糖蛋白及磷蛋白的测定43

应用免疫学方法检测蛋白质44

酶的检测44

分离蛋白质的回收45

蛋白质区带的定位45

蛋白质的洗脱46

基本技术的改进47

寡肽的分子量分析47

特殊蛋白质的分离47

组蛋白48

浓度梯度凝胶52

大批量凝胶57

微型柱胶和微型板胶57

琼脂糖-丙烯酰胺混合凝胶59

均一性和同一性59

矫作物及故障62

综合性参考文献63

第2章“定量”和制备性的聚丙烯酰胺凝胶电泳64

引言64

定量PAGE电泳仪概述64

凝胶的选择66

缓冲系统的选择67

不连续的和连续的区带电泳67

可供选择的不连续缓冲系统：Jovin输出68

定量PAGE方法70

策略70

最适pH71

堆积界限的选择77

对蛋白质稳定和分离最佳条件的选择77

最适孔径：Ferguson曲线图79

同一性试验85

分子大小和电荷异构87

物理特性88

最适分离孔径92

制备性PAGE93

凝胶切片的提取94

连续区带洗脱96

第3章等速凝胶电泳100

引言100

操作程序100

稳态堆积条件的最佳化100

堆积区内的分离试验101

凝胶切片提取法进行制备性等速电泳102

用连续区带洗脱法进行制备性等速电泳105

连续区带洗脱法进行制备性稳态堆积106

第4章分析和制备性凝胶聚焦电泳107

应用凝胶聚焦电泳的时机107

仪器108

柱胶与水平板胶装置108

电压控制装置109

梯度监测装置110

凝胶111

聚丙烯酰胺凝胶111

Sephadcx凝胶112

琼脂糖凝胶112

pH梯度的形成112

“Ampholine”与缓冲液112

两性或非两性载体组分113

平坦的和陡峭的pH梯度114

pH梯度的直线性114

高离子强度下电聚焦114

去污剂存在下的聚焦电泳116

阳极和阴极电解液的选择116

聚焦电泳的动力学117

pH梯度117

蛋白质119

导电性119

分析性凝胶聚焦电泳程序120

制备性凝胶聚焦电泳126

仪器126

程序127

第5章双向凝胶电泳129

导言129

仪器129

第一向凝胶130

第二向凝胶130

双向凝胶电泳的一般技术131

溶液和仪器131

样品的制备132

第一向凝胶的制备133

平衡第一向凝胶以便进行第二向分离133

第二向凝胶的制备134

多肽分布的分析134

双向凝胶电泳的比较分析136

根据等电点及分子量进行蛋白质双向分离136

第一向分离137

第二向分离138

基本技术的改进140

影响分离的因素142

膜蛋白分离的改进143

特殊类型蛋白质的分离144

核糖体蛋白144

组蛋白146

核蛋白148

第6章蛋白质部分水解后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳肽图151

导言151

仪器152

方法学152

实验步骤152

基本技术的改进155

资料的解释157

第7章免疫电泳158

引言158

抗原和抗体的制备159

抗原159

抗体的产生159

抗血清商品161

抗体活性分析161

IgG抗体的纯化161

简易免疫电泳162

仪器162

试剂163

方法164

放射免疫电泳165

酶检测法166

免疫电泳法的其它改进167

对流电泳167

“火箭”免疫电泳167

双向免疫电泳（交叉免疫电泳）167

故障170

综合性参考文献170

附录Ⅰ多肽检测方法文献目录171

多肽检测的一般方法171

染色法171

荧光染色法172

直接检测法172

以放射性同位素为基础的检测方法173

特殊多肽的检测方法174

糖蛋白174

磷蛋白174

核蛋白175

具有可以进行反应的巯基蛋白质175

含镉蛋白175

胶原（蛋白）及原胶原蛋白175

免疫方法175

酶检测法176

附录Ⅱ同位素标记蛋白质用试剂180

一览表180

试剂181

乙酸酐(3H或14C)181

Bolton和Hunter试剂(125I)181

溴乙酸(14C)182

氯乙酸(14C)182

对-氯汞苯磺酸(203Hg)182

对-氯汞苯甲酸(20？Hg)183

丹磺酰氯(5-二甲胺-1-萘磺酰氯) (3H或14C)183

DHP(二异丙基氟磷酸)（3H）184

乙基亚胺乙酯(14C)184

N-乙基马来酰亚胺(？4C)185

1-氟-2,4-二硝基苯(3H或14C)185

甲醛(14C)186

碘(12？I)186

碘乙酰胺(14C)187

碘乙酸(3H或14C)187

乙磺酰乙酰亚胺(14C)188

马来酸酐(14C)188

甲基3,5-二碘羟基苯亚胺(12？I)188

异硫氰酸苯酯(24C或？?S)189

氢硼化钾（3H）190

氢硼化钠（3H）190

琥珀酸酐(14C)191

N-琥珀酰亚胺丙酸（3H）191

附录Ⅲ选择蛋白质标志物的分子量及等电点193

附录Ⅳ供应电泳专用附件的厂商195

参考文献196