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重要说明1

目 录1

缩写2

第一章RNA的凝胶电泳 Don Grierson3

1．引言3

2．管状聚丙烯酰胺凝胶电泳4

2.1设备4

2.2制备凝胶4

5．分子量的测定 （15

2.3电泳设备的组装6

2.4样品制备和加样6

2.5凝胶的电泳7

2.6凝胶扫描8

2.7凝胶切片8

2.8凝胶切片放射性的测定9

2.9 RNA的洗脱和回收10

3．管状凝胶法的若干改进11

3.1电泳前DNA的去除11

3.2加样前RNA的变性11

3.3非控制温度下的电泳11

3.4梯度凝胶12

3.5可溶性聚丙烯酰胺凝胶12

4.1甲酰胺凝胶13

4．变性凝胶13

3.7其他电泳缓冲液13

3.6琼脂糖－丙烯酰胺复合凝胶13

4.2尿素凝胶14

4.3羟甲基汞凝胶14

5.1非变性凝胶15

5.2变性凝胶16

6．板状聚丙烯酰胺凝胶电泳16

6.1装置16

6.2凝胶配方17

6.3灌胶19

6.5板状凝胶中RNA的检测和回收20

6.4电泳20

6.6 RNA转移至重氮苄氧甲基纸上的杂交分析23

7．聚丙烯酰胺凝胶电泳存在的问题及其解决办法25

8．组蛋白信使RNA的纯化：实例研究28

参考文献29

第二章DNA的凝胶电泳 Paul G.Sealey和Ed M.Southern31

1．引言31

2．主要技术及其应用31

2.1装置31

2.2非变性凝胶缓冲液33

2.3变性凝胶缓冲液34

2.4凝胶制备34

2.5样品制备和加样37

2.6凝胶电泳标准DNA的大小38

2.7电泳条件38

2.8电泳后的凝胶分析39

2.9从琼脂糖凝胶回收DNA片段41

2.10用杂交法分析DNA片段43

3．DNA的大规模制备性凝胶电泳46

3.1环形制备装置46

1.2仪器 （150

3.2线形制备装置52

3.3分级分离的实例55

4．致谢58

参考文献58

第三章 核酸双向凝胶电泳 Rupert De Wachter和Walter Fiers60

1．RNA双向凝胶电泳导论60

1.1影响RNA在聚丙烯酰胺凝胶中电泳迁移率的因素60

1.2双向凝胶系统的主要类型61

2．RNA双向电泳分离的仪器和实验程序63

2.1第一向电泳分离63

2.2第二向电泳分离65

2.3程序的变动与修正66

2.4温度控制67

2.5放射自显影67

2.8从凝胶中回收RNA68

2.7切片放射性的测定68

2.6无放射性RNA的检测68

3．双向电泳分离RNA的实例69

3.1寡核苷酸的分离69

3.2 RNA片段的分离73

3.3小分子RNA的分离75

3.4mRNA的分离76

4．DNA双向凝胶电泳概述79

5．限制片段的常规凝胶电泳分离DNA79

5.1电泳分离的基础79

5.2第一向凝胶电泳分离79

5.3第二向凝胶电泳分离80

5.4技术应用实例：病毒DNA限制酶切片段的分离81

6.1分离的基础82

6．变性梯度凝胶分离DNA限制酶切片段82

6.2装置82

6.3第一向分离83

6.4第二向分离84

6.5凝胶的染色和放射自显影85

6.6技术应用实例：细菌DNA限制酶切片段的分离85

7．致谢85

参考文献86

第四章DNA序列分析 R.Wayne Davies87

1．引言87

2.1仪器和材料89

2．用链终止法进行DNA序列分析89

2.2微量液体的操作90

2.4 DNA片段的分离91

2.3引物片段的特征91

2.5单链DNA模板的制备96

2.6引物和模板的退火97

2.7引物DNA的合成反应98

2.8核糖取代反应：除去引物片段的另一种方法101

2.9链终止法测定DNA序列的应用102

3．DNA序列分析用聚丙烯酰胺凝胶的制备104

3.1仪器104

3.4贮备液106

3.3制备凝胶模型106

3.2材料106

3.6制备电泳凝胶107

3.5灌胶107

3.7加样108

3.8电泳108

3.9制备放射自显影凝胶108

3.10放射自显影109

4．链终止序列测定中放射自显影图谱的阅读和释意109

4.1凝胶放射自显影图谱释义中的一般性问题110

5．M13序列分析系统111

5.1噬菌体M13的特征111

5.2 M13克隆系统112

5.3 M13克隆系统的应用113

5.4用M13系统进行链终止序列分析116

6．DNA序列的化学分析法119

6.1主要方法步骤119

6.2仪器和材料120

6.3 DNA片段的用量和纯化121

6.4 DNA片段的末端标记121

6.5标记一端的DNA片段的分离125

6.6碱基特异性的裂解反应126

7．计算机的使用129

参考文献129

6.8 Maxam-Gilbert序列分析凝胶的放射自显影图谱的阅读与释意129

6.7反应产物的电泳129

第五章RNA序列分析 James M.D′Alessio131

1．引言131

2．用于序列分析的RNA分离132

3．RNA微克数量级的处理132

3.1核糖核酸酶的预防132

3.2反应容器133

3.3 RNA的乙醇沉淀133

4．序列分析用RNA的末端标记综述133

4.1 5′末端标记133

4.3制备性凝胶电泳134

4.2 3′末端标记134

5．序列分析所用末端标记RNA的制备135

5.1除去帽子结构135

5.2用〔γ-3 2P）ATP和T4多核苷酸激酶标记5′末端136

5.3用〔5′-32P〕pCp和T4RNA连接酶标记3′末端136

5.4聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化32P-RNA137

5.5从聚丙烯酰胺凝胶中洗脱32P-RNA138

6．序列分析前的RNA专一性裂解139

6.1核糖核酸酶H的片段化战略…………………………………………………（139 ）6.2 RNA的位点专一性切割139

7．RNA的碱基专一性切割：酶促序列分析140

7.1概述140

7.2 RNA酶法序列分析的步骤141

8．RNA的碱基专一性切割：化学序列分析法142

7.3 RNA的碱水解142

8.1概述…………………………………………………………………………………（142 ）8.2 RNA化学序列分析的程序143

9．RNA序列分析用凝胶145

9.1主要考虑的因素145

9.2薄层序列分析凝胶的灌胶146

9.3序列分析凝胶的放射自显影147

9.4放射自显影图谱的解读147

参考文献149

第六章 核蛋白的电泳 Graham H.Goodwin和Albert E.Dahlberg150

1．核小体的电泳150

1.1引言150

1.3贮备液151

1.5聚丙烯酰胺凝胶平板的制备152

1.4样品的制备152

1.6加样与电泳153

1.7各种核小体带的检测153

1.8从凝胶中提取核小体颗粒154

1.9核小体中蛋白质和DNA的回收与分析155

1.10可能出现的问题及其解决办法156

1.11核小体的双向电泳157

2.1引言159

2.2仪器159

2．核糖体和多核糖体的电泳159

2.3贮备液160

2.4样品制备160

2.5琼脂糖－丙烯酰胺复合凝胶的制备161

2.6加样与电泳162

2.7凝胶染色162

2.8双向凝胶电泳162

2.9各种复合凝胶的应用163

2.10可能出现的问题及其矫正措施167

参考文献168

附录 Ⅰ 核酸分子量的标准试剂 Stephen Minter和Paul Sealey169

Ⅱ 供应电泳专用商品的厂商173