《表2.重组红藻凝集素G的表达》

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《红藻凝集素G研究进展》

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利用基因工程技术表达重组红藻凝集素G，为其研究提供稳定的物质基础是非常必要的。因此，研究人员先后尝试了多种表达系统（表2），以期获得表达量高、易纯化、易储存、安全性好的重组红藻凝集素G。研究人员首先采用pET 28a（+）表达载体在E.coli BL21（DE3）中进行表达，利用IPTG进行诱导表达时，大部分红藻凝集素G在包涵体中以不可溶的形式存在，为使红藻凝集素G获得可溶性表达，研究人员更换培养基进行自诱导表达，其可溶性大大提高，表达量也提高了45倍[20]；笔者采用pET 32a（+）表达载体在经研究团队改造的E.coli BL21（DE3）中利用IPTG进行诱导表达时，获得了可溶性表达，表达量可达88 mg/L；利用烟草花叶病毒（TMV）载体在烟草中进行表达也有报道[13，21–22]，值得一提的是Fuqua等[21]利用红藻凝集素G极好的热稳定性对其实现了初步分离，在50–80°C条件下，除TMV外壳蛋白外，绝大部分杂蛋白因变性而沉淀出来，通过离心即可得到相对较纯的红藻凝集素G；还有研究人员利用农杆菌转化法使红藻凝集素G基因整合到烟草基因组中，实现了红藻凝集素G的稳定表达[23]；利用叶绿体表达系统在烟草中也成功表达了红藻凝集素G[24]，该研究还显示收获的转基因烟草干燥后于室温放置长达10个月，红藻凝集素G仍稳定存在，且其抗病毒活性不受影响；另外，水稻胚乳作为公认的表达药用重组蛋白的理想工具，Vamvaka等[25]尝试了利用水稻胚乳表达系统生产红藻凝集素G，以期获得易储存、安全性更好的红藻凝集素G。