《表2 circRNA-PTENP1、circRNA-HIPK3与GAPDH的引物序列》

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《血清环状RNA PTENP1、HIPK3联合β-HCG在绒毛膜癌诊断和预后评估中的价值》

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按照血清RNA提取试剂盒说明书步骤进行血清总RNA提取。取上述提取的RNA，使用去除基因组逆转录试剂盒逆转录为cDNA，进行实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，RT-PCR）。RT-PCR按照SYBR GREEN说明书进行，反应体系为:Mix10μl，上下游引物各0.8μl，cDNA 2μl，DEPC水6.4μl。荧光定量PCR循环条件:95℃变性5 min；95℃30 s，60℃30 s，72℃30 s，45个循环，每组设置3个复孔。应用PrimerPremier5.0进行PCR引物设计，使用的circRNA-PTENP1、circRNA-HIPK3与GAP-DH引物序列见表2，引物合成由北京赛百盛基因技术有限公司提供。采用2-ΔΔCt法计算circRNAs的相对表达量，△Ct值=样本Ct值-GAPDH Ct值。血清circRNA-PTENP1、circRNA-HIPK3和GAPDH基因熔解曲线峰型单一，说明引物没有形成引物二聚体，也没有非特异性扩增。