《表1 Bcl-2和GAPDH的引物序列表》

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《紫外线在低氧条件下对急性早幼粒白血病细胞增殖的影响及机制研究》


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将HL-60细胞以1×106个细胞/孔的密度接种在24孔板中,并按照分组分别进行相应处理。按照RNAiso Plus试剂盒提供的方法提取各组待测细胞的RNA。在冰浴上按PrimeScriptTM RT reagent Kit逆转录试剂盒说明书配制RT反应液,并逆转录合成cDNA。特异性扩增引物由生工生物工程(上海)股份有限公司设计并合成(表1)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)扩增反应体系(20μL):SYBR Premix Ex TaqTM 10μL,上、下游引物各0.8μL,cDNA模板2.0μL,dH2O 6.4μL。反应条件:95℃预变性30 s;95℃5 s,60℃34 s,40个循环。根据测得的Ct值,计算Bcl-2 mRNA的相对表达量,结果以2-△△Ct表示,△△Ct=(实验组Bcl-2平均值-实验组GAPDH平均值)-(对照组Bcl-2平均值-对照组GAPDH平均值)。实验独立重复3次。