《表1 Livin和GAPDH引物序列》

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《靶向干扰Livin对HEC-1-A细胞侵袭迁移能力的影响》

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转染后48h，用预冷却的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤6孔板中的细胞2次，Trizol法提取细胞总RNA。由大连宝生物公司设计合成目的基因Livin及内参基因GAPDH的引物序列（表1）。根据Takara RNA PCR TM KIT（AMV）Ver.3.0说明书逆转录合成cDNA第1条链，应用SYBR Green qPCR SuperMIX-UDG试剂盒进行qRT-PCR反应。反应条件:95℃3min共1循环，95℃30s、60℃30s、72℃30s共40循环，然后95℃1min、60℃30s、95℃30s进行熔解曲线分析。应用2-△△ct方法计算目的基因相对表达量。