《表1 claudin-2、-10、-17及GAPDH引物的正反义序列》

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《紧密连接蛋白在缺血再灌注肾损伤小鼠肾脏中的表达及意义》

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按TRIzol试剂说明书抽提肾组织总RNA，用紫外线分光光度仪鉴定m RNA浓度和纯度，根据所测浓度加入DEPC水稀释成0.5?g/L质量浓度，保存于-80℃中。应用TaKaRa公司RT-PCR扩增试剂盒扩增目的基因。各基因引物序列见表1。PCR反应体系（25?μL）:cDNA模板2?μL，10×PCR?Buffer?2.5?μL（Mg2+Free），dNTP?Mixture?2?μL，Taq酶?0.125?μL，Mg2+?1.5?μL，上、下游引物各0.5?μL，dH2O?15.875?μL。在梯度?PCR仪（Veriti?96，美国?ABI公司）上进行?PCR?反应，PCR反应条件:94℃预变性5?min；然后按94℃?30?s，55℃?30?s，72℃?2?min，共35个循环；最后74℃延伸10?min。反应产物4℃保存。PCR产物进行电泳、摄像，DRAFT-alphaview软件分析图像中的条带灰度。将各组目的基因条带灰度值分别与相应组内参基因GAPDH条带灰度值相比较，得到的比值即为各组目的基因mRNA的相对表达量。