《表1 实时聚合酶链反应引物序列表》

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《诺考哒唑介导的细胞骨架重塑对人间充质干细胞成骨分化的影响》

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两组细胞培养至第7 d，每孔加入1 ml的Trizol提取总RNA，用Nano-drop2000测量RNA浓度并鉴定RNA的纯度，根据测定的RNA浓度，取1μg总RNA，根据20μl体系，一步法反转成c DNA，将得到的c DNA稀释12.5倍，进行实时PCR。实时PCR扩增体系为11μl体系，包括稀释的c DNA 5μl，上下引物各0.2μl，双纯水0.4μl，SYBR Premix Ex TaqTM（2X）5μl，ROX Reference Dye（50X）0.2μl。样品混匀后于Real—Time PCR仪上反应。PCR反应引物如表1。每个模板3个副孔，以GAPDH为内参。通过原始数据计算出2-△△Ct的值，反映目的基因mRNA的表达水平。