《表1 实时聚合酶链反应引物序列》

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《刘氏正骨方对BMSCs成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响》

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收集细胞样品，抽取总RNA，以2μg反转20μL体系进行反转录。检测目的基因的m RNA表达。将反转的c DNA稀释5倍，进行实时PCR。扩增体系为10.0μL，反应条件：95℃预变性30 s；95℃5 s、60℃25 s，扩增50个循环。溶解曲线分析：95℃5 s；溶解曲线为单一峰说明是特异性扩增，阴性对照为dd H2O，GAPDH为内参，每个模板做3个复孔，结果使用相对定量2-ΔΔCt方法分析。引物序列详见表1。