《表1 克隆引物与定量RT-PCR检测引物》

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《地黄环烯醚萜合酶基因的克隆、序列特征与表达分析》

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根据候选环烯醚萜合酶基因的c DNA序列分别设计特异引物（表1），分别扩增包含完整编码区的cDNA片段，PCR产物纯化后送测序公司测序，确定基因的正确序列。PCR扩增体系25μL，包括5μL的5×PrimeSTAR缓冲液（Mg2+plus），2μL的dNTP混合物，0.5μL正向引物（10μmol·L-1）和0.5μL反向引物（10μmol·L-1），0.5μL模板cD-NA，0.25μL PrimeSTARHS DNA聚合酶（2.5 U·μL-1），添加16.25μL的ddH2O。反应条件:98℃，30 s；98℃10 s，58℃15 s，72℃2 min，共35个循环；72℃延伸5 min。