《表2 PCR鉴定Pb Sey1敲除疟原虫引物》

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《伯氏疟内质网塑形蛋白SEY1敲除质粒的构建及转染》

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伯氏疟原虫经同步化培养后约80%的疟原虫均已发育为成熟裂殖体，在此阶段进行转染效率最高。经电转后的疟原虫在小鼠体内生长，每日监测血涂片，100倍油镜下观察100个视野，若观察到疟原虫即为阳性，未找到则为阴性。转染后次日即出现疟原虫阳性，于小鼠饮水中加入乙胺嘧啶，给药2 d后血涂片疟原虫转为阴性，遂撤药。停药后第5天疟原虫再次转为阳性，至停药后第9天虫血率长至5%，心脏取血纯化疟原虫，提取基因组DNA，PCR鉴定及PCR产物DNA测序结果提示成功获得Pb Sey1缺失疟原虫突变体，但为混合克隆，PCR条带灰度分析显示Pb Sey1缺失疟原虫突变体约占50%（表2，图4）。