《表1 PCR引物及序列》

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《人IgE Fc基因的克隆、纯化、真核表达载体的构建及序列测定》

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注:人β-actin大小为626 bp，Ig E Fc基因大小为1 258 bp

Trizol裂解细胞后用氯仿提取细胞总RNA，经核酸定量仪测定RNA浓度和纯度后用反转录试剂盒反转录合成cDNA；然后以cDNA为模板，以β-actin为内参，用实时定量PCR仪分别对IgE Fc段基因进行荧光定量检测，引物序列见表1。总反应体系为20μl，反应条件:95℃预变性5 min；95℃变性45 s，60℃退火45 s，72℃延伸30 s，72℃终延伸10 min，共进行35个循环。对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定分析。