《表1 扩增靶标mRNA的引物》

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《shRNA抑制NANOG基因表达对肾癌细胞A498侵袭力的影响》

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使用RNA提取试剂盒从细胞中提取总RNA。qRT-PCR严格按照Bril-liantⅡSYBR Green QRT-PCR Master Mix Kit试剂盒使用说明书进行，并使用GAPDH作为内参。qRT-PCR反应用Mx-300 PCR cycler仪器进行40个循环。PCR反应程序如下:50℃，30 min（逆转录）；95℃，15 min（预变性）；95℃，15 s（变性）；60℃，1 min（退火），72℃，30 s（延伸），72℃，10min（延迟）。试验中使用的引物序列如表1所示。相对基因表达量使用Mx3000p软件（version 2.0）计算其2-ΔΔCt。