《表3 qRT-PCR引物》

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《luxR基因调控嗜水气单胞菌耐药性的分子机制初探》


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B11和luxR05735-RNAi菌株培养至对数生长期,收集菌体提取RNA,测定其浓度,电泳检测后进行反转录,以B11菌株作为对照,选取稳定表达的16S rRNA基因作为内参,进行qRT-PCR,具体引物序列见表3。反转录和荧光定量PCR过程严格按照试剂盒说明书进行操作。qRT-PCR反应体系为10μl:q-PCR Mix 5μl、ddH2O 4μl、cDNA模版0.5μl、上、下游引物各0.25μl。PCR反应条件:95℃预变性10 min;95℃变性20 s,58℃退火20 s,72℃延伸20 s,40个循环。