《表1 9个与光合作用相关的基因及RT–q PCR引物序列》

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《甘蓝型油菜光合基因的表达及其与含油量的关系》

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实时荧光定量PCR:在ABI7500荧光定量PCR系统上进行q RT–PCR，采用北京全式金生物有限公司生产的Trans Start Green qPCR SuperMix UDG试剂盒和MLL—9651（Bio–Rad）PCR板。PCR体系包括:1μL cDNA、10μL 2×FastStart Universal SYBR GreenMaster（ROX）、10μmol/L上游引物（CCTCTG GAGCCTCCTCAAGT）和下游引物（CATATCTCCC CTGTCTTGAAATGC）各0.5μL、8μL ddH2O。PCR程序为:95℃预变性10 min；95℃变性15 s，60℃退火15 s，72℃延伸32 s，35个循环。反应完成后，从60℃起，每秒增温0.05℃至98℃，以绘制溶解曲线图，检测扩增产物的正确性。以BnaUBC21为内参基因，检测光合作用相关基因时空表达。研究选用的基因和RT–qPCR引物如表1所示。试验重复3次，结果取平均值。基因表达分析采用比较周期阈值法[15]进行评价。