《表1 RT-PCR引物列表》

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《绿原酸对人胶质瘤细胞U251的抗肿瘤活性及其促凋亡机制》

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收集对数生长期U251细胞，以1×106个/孔接种于6孔板过夜培养，次日加入含有不同浓度绿原酸（0、20、40、80、160μg/ml）的培养基2 ml，处理48 h后，每孔加入0.5 ml RNAiso plus提取总RNA，分光光度仪检测RNA的浓度与质量，OD260/OD280在1.8～2.0左右的RNA进行反转录成cDNA，-20℃保存备用。采用RT-PCR试剂盒按照说明书操作，检测基因mRNA的表达水平。RT-PCR引物序列，见表1。RT-PCR 10μl反应体系包括:4μl体系（0.2μl上游引物、0.2μl下游引物、0.2μl Rox、3.4 ml DEPC水）加6μl体系（0.1μl cDNA模板、0.2μl Mix、0.7μl DEPC水、5μl TB Green）。两步法PCR扩增条件:保温阶段:95℃30 s；循环阶段:95℃5 s，60℃30 s，共40个循环。