《表1 RT-PCR相关引物列表》

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《艾叶油对小鼠肝脏生物钟基因Bmal1、Clock mRNA时辰变化的影响》

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采用实时荧光定量RT-PCR方法，以β-actin作为参照基因，检测Bmal1、Clock生物钟基因的相对表达水平。Trizol试剂从细胞中提取总RNA。使用PrimeScriptTMRT reagent Kit with g DNA Eraser试剂盒将总RNA逆转录为c DNA，Master Mix10μL分别为Primer Script RT Enzyme Mix I（1.0μL)、RT Primer Mix×4 （1.0μL）、5×Prime Script Buffer 2 （for Real-time）（4.0μL）、RNase Free d H2O （4.0μL），逆转录反应的总体积为20μL，逆转录反应体系为37℃15 min，85℃5 s。进行PCR反应，取c DNA 2μL，TB Green Primix Ex TaqⅡ10μL，上下游引物各0.8μL，Rox Reference Dye or DyeⅡ(50×）0.4μL，PCR反应总体积为20μL。使用以下扩增体系进行PCR扩增:Stage1中先将DNA聚合酶在95℃预热变性30 s，Stage2在循环体系95℃5 s，60℃30～40 s中循环40次。引物序列见表1。