《表1 荧光定量微生物引物序列》

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《保育和育肥猪舍气溶胶微生物组成和四环素类抗性基因丰度研究》

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参照Bergstr?m等[9]和Liu等[10]的方法，检测8个保育舍和8个育肥舍的气溶胶中特定微生物类群的丰度。本试验测定了猪舍气溶胶中总菌（Universe）、厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、梭菌纲（Clostridia）、乳杆菌属（Lactobacillus）、普雷沃氏菌属（Prevotella）、拟杆菌属（Bacteroides）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、罗氏菌属（Roseburia）、罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）、约翰逊氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）的丰度。引物序列见表1。采用11μL荧光定量PCR反应体系:2μL DNA，2.7μL无核酸酶水，上、下游引物各0.4μL（10μmol/L）和5.5μL2×KAPA SYBR FAST qPCR Kit Master Mix。反应条件:50℃2min，95℃10min，40个循环变性/退火（95℃15 s，60℃1 min）和熔解曲线过程（70℃至90℃，每5 s上升0.5℃）。荧光定量反应在ABI7600仪器上进行。从ABI7600的数据软件SDS中导出每个孔ΔRn的数据，导入LinregPCR软件，分析每个样品目的微生物的扩增效率，并计算目的微生物的平均扩增效率。结合每个目的扩增产物的响应阈值和平均扩增效率，计算样品中该目的微生物的起始浓度（N0，specific）。根据总菌的起始浓度，计算目的微生物在菌群中的相对比例（N0，specific/N0，universe）。