《表1 相对荧光定量引物序列》

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《食管癌组织端粒保护蛋白TPP1表达及临床意义》

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采用实时荧光定量PCR检测组织mRNA表达，称取50mg样本+1mL Trizol匀浆，常规Trizol法提取组织总RNA。使用美国Thermo Fisher公司核酸浓度检测仪检测RNA浓度和A值，再应用德国Roche公司Transcriptor First Strand cDNA Synthesis试剂盒将RNA逆转录成cD-NA，以其为模板进行实时荧光定量PCR扩增。扩增反应总体积为20μL，体系包括Fast SYBR Green Master mix 10μL，上下游引物0.2μL，cDNA模1μL，加入灭菌双蒸水至总体积20μL，每个样本上3个复孔。反应条件按照预变性95℃10min，变性95℃30s，退火62℃30s，延伸72℃1min，40个循环。PCR反应结果数据采用德国Roche公司LightCycler96系统分析，按照公式2-ΔΔCt计算癌组织和癌旁组织TPP1的mRNA相对表达量。