《表3 PCR反应条件:pEASY-E1-Int1表达载体的点突变改造与整合酶的表达分析》
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《pEASY-E1-Int1表达载体的点突变改造与整合酶的表达分析》
提取p EASY-E1-Int1的质粒DNA。一个正向引物,5个反向引物逐个引入突变位点进行PCR扩增,PCR反应体系为,10×KOD neo PCR Buffer 10μL,d NTP(2.5 mmol/L)10μL,Mg SO46μL,Primers 1μL,KODneo plus(5 U/μL)2μL,dd H2O 64μL,DNA 2μL(表2)。反应条件为预变性95℃4 min,95℃30 s,60℃30 s,68℃45 s,再延伸68℃10 min,共30个循环(表3)。连续进行5个回合,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳检测回收。PCR回收产物采用NEB公司DpnⅠ酶切4 h,直接转化DH5α,挑选克隆测序。
图表编号 | XD0062457600 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.06.25 |
作者 | 贾芳、杨江流、宋青山、梁艳霞、王海龙 |
绘制单位 | 河套学院、河套学院、河套学院、巴彦淖尔中医医院、巴彦淖尔中医医院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |