《表2 PCR反应体系：pEASY-E1-Int1表达载体的点突变改造与整合酶的表达分析》

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《pEASY-E1-Int1表达载体的点突变改造与整合酶的表达分析》

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提取p EASY-E1-Int1的质粒DNA。一个正向引物，5个反向引物逐个引入突变位点进行PCR扩增，PCR反应体系为，10×KOD neo PCR Buffer 10μL，d NTP（2.5 mmol/L）10μL，Mg SO46μL，Primers 1μL，KODneo plus（5 U/μL）2μL，dd H2O 64μL，DNA 2μL（表2）。反应条件为预变性95℃4 min，95℃30 s，60℃30 s，68℃45 s，再延伸68℃10 min，共30个循环（表3）。连续进行5个回合，PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳检测回收。PCR回收产物采用NEB公司DpnⅠ酶切4 h，直接转化DH5α，挑选克隆测序。