《表1 引物序列：尿黑酸双加氧酶基因工程菌的构建》

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《尿黑酸双加氧酶基因工程菌的构建》

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根据双加氧酶序列及组成型启动子序列作为模板分别设计上下游引物。为了重组PCR的需要设计扩增启动子序列的下游引物有部分碱基与双加氧酶基因5'端重叠，扩增双加氧酶基因序列的上游引物与启动子序列的3'端有部分碱基重叠（表1）。这些引物通过Over-lap PCR（许力等，2016）得到由组成型启动子控制表达的P2-Dio6、PspoⅠ-II-Dio6基因片段（图6），随后通过TA克隆至PMD-19T（Simple）载体中得到重组质粒PMD-19T-P2-Dio6、PMD-19T-PspoⅠ-II-Dio6。将PMD-19T-P2-Dio6、PMD-19T-Pspo I-II-Dio6重组质粒转化DH5α得到由组成型启动子控制表达的工程菌分别为PspoⅠ-II工程菌、P2工程菌。将PET-28a-T7-Dio6重组质粒转化BL21（DE3）得到诱导型启动子控制表达的工程菌PT7工程菌。