《表1 重组大肠杆菌纤维素酶活力 (OD540) *》

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《产纤维素酶大肠杆菌工程菌的构建和酶的表达》

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注:*表示数值为3个样品的平均值±标准偏差；ND:未检出

培养重组大肠杆菌，取4 m L培养液加入终浓度0.5 mmol/L的IPTG诱导5 h，分别取诱导和非诱导的菌液，离心后取上清测定CMCA（缓冲液pH值6），以确定重组蛋白质是否表达。测定结果显示，未诱导时，上清液的吸光度（OD540）为0.171 3±0.010 9；诱导后，吸光度为0.335 4±0.000 2，可见诱导后重组蛋白质得到了表达并分泌到细胞外。对重组大肠杆菌进行表达优化，按最适条件进行诱导，将培养液上清浓缩约10倍后测定酶活；用超声波破碎仪裂解重组细胞，离心后取裂解液上清测酶活（表1）。在酸性条件下，培养液上清滤纸酶活为1.13 U/m L，周质上清滤纸酶活力为5.78 U/m L；培养液上清CMCA为0.63U/mL，检测不到周质上清的CMCA，这可能跟大部分蛋白质形成包涵体有关。在碱性条件下检测不到纤维素酶活力（数值未显示）。