《表4.硫解酶动力学参数：克氏梭菌硫解酶的鉴定及其功能研究》

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《克氏梭菌硫解酶的鉴定及其功能研究》

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以不同浓度的乙酰乙酰辅酶A和50?mol/L辅酶A为底物，测定克氏梭菌来源的3个硫解酶和丙酮丁醇梭菌来源的硫解酶ThlAca对四碳底物（乙酰乙酰辅酶A）降解的动力学参数。ThlA1、ThlA2、ThlA3和ThlAca对乙酰乙酰辅酶A的Km值分别为65.1?mol/L、62.3?mol/L、65.0?mol/L和57.8?mol/L（表4）。可见，克氏梭菌来源的3个硫解酶对底物乙酰乙酰辅酶均具有相似的亲和力，与丙酮丁醇梭菌来源硫解酶ThlAca的底物亲和性相当。从kcat值来看，ThlA2（2.5×106 s–1）和ThlA3（2.6×106 s–1）与丙酮丁醇梭菌的ThlAca（2.4×106 s–1）相当，均高于ThlA1（1.7×106 s–1）。因此硫解酶ThlA1对C4底物（乙酰乙酰辅酶A）的催化能力略低于硫解酶ThlA2和ThlA3，推测3个硫解酶均可以参与丁酸的合成。结合3个硫解酶编码基因在克氏梭菌中均具有相当高的表达水平，我们推测克氏梭菌可以表达出3种具有生物活性的硫解酶蛋白。但这3种硫解酶如何进行全酶组装，在催化合成3-酮基己酰辅酶A反应中是否具有不同的催化能力尚需深入研究。