《表2 鉴定引物Tab.2 Primers for identification》

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《弓形虫子孢子抗原SporoSAG基因缺失虫株的构建》

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将PCR鉴定阳性的库，利用限制稀释法在长满HFF细胞的96孔板中进行单克隆筛选（2个速殖子/孔），37℃培养7 d，待虫体溢出后，一部分重新挑至24孔板传代培养，另一部分提取基因组，利用PCR对所有单克隆进行初步鉴定（引物见表2），PCR1和PCR2分别检测5′同源臂和3′同源臂是否正确整合，PCR3用来检测基因SporoSAG是否被敲除。将初步鉴定正确的单克隆敲除株接种到T25培养瓶中继续扩大培养，传代5次再进行鉴定（确定是否稳定遗传），最终鉴定正确的虫株为单克隆敲除株。