《表2 实时定量PCR引物Tab.2 Primers used for quantitative real-time PCR》

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《葱蝇防御素基因的鉴定及针刺对基因表达的影响》

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采用Trizol法从单个滞育蛹或非滞育蛹中提取总RNA，利用琼脂糖凝胶电泳和NanoDrop核酸定量仪检测RNA的完整性及浓度。以3μg RNA为模板，按照HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit（Fermentas公司）反转录试剂盒的操作说明进行第一链cDNA的合成，存于-80℃待用。设计葱蝇防御素基因的特异性引物（表2）并进行qPCR分析。qPCR总体系为20μL，包括30ng cDNA，10μL SYBRPremix Ex TaqTMII，0.8μL基因特异性引物（10μmol·L-1），用ddH2O补足至20μL。反应条件为:94℃预变性5 min；94℃变性15s，60℃退火15s，68℃延伸20s，共40个循环。每个样品均进行3次生物学重复和2次技术重复。以葱蝇Gapdh和α-Tublin作为内参基因对实验结果进行几何平均数处理，采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量[16]。