《表2 荧光定量引物Tab.2 Primers used for real-time quantitative PCR analyze》

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《翘嘴鳜USP7基因cDNA的克隆及饥饿对其表达影响分析》


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使用Primer 6.0软件,根据翘嘴鳜18S基因序列(AY452495)和翘嘴鳜USP7基因CDS区域保守序列设计特异性荧光定量引物(见表2)。在荧光定量仪(Light Cyccler,Rotor-Gene公司)中采用SYBR GreenⅠ染料法进行PCR扩增和数据分析,检测USP7基因在肝脏饥饿中的表达水平变化。荧光定量反应条件为:预变性94℃,30s;循环数40(94℃,5s;58~60℃,25s;72℃,15s);反应终止65~95℃,60s。溶解曲线0.05℃/1次,65~95℃,统计实验数据并处理。