《表1 关键分子引物序列》

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《天灸疗法对支气管哮喘患儿TLR4/NF-κB信号通路关键分子基因表达的影响》

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试验方法:取静脉血500μL加入15 m L离心管内，加入裂解液10 m L，充分裂解；待管内液体变澄亮后，离心；去掉上层清液，留底液约100μL；PBS反复洗涤3次。加入RNA iso plus 1 m L，充分吹打，放置于冰上充分裂解10 min。按照Prime Script Rt Master Mix Perfect Real Time试剂盒要求的实验方法提取总RNA，运用Bio Photometer对RNA质量进行分析；按照SYBR Premix Ex Taq TMⅡ（Tli RNase H Plus）以及Premix Ex Taq TM（Probe q PCR）试剂盒实验方法，将总RNA反转录成c DNA；运用实时荧光定量PCR仪（7500）进行实时荧光定量法检测TLR4、NF-κB mRNA的转录水平。Real-time PCR反应条件:预变性95℃，持续15 s，变性温度95℃，持续5 s，退火温度60℃，持续34 s，40个循环，同时做熔解曲线。Real-time PCR检测独立重复3次。本研究涉及关键分子引物序列，见表1。