《表1 不同分组的酶液组成》

《“红颜”草莓原生质体制备及瞬时转化体系的建立》

取继代培养后的“红颜”草莓幼嫩叶片0.02 g，70%酒精消毒40 s，无菌水冲洗3遍，再用0.5%次氯酸钠溶液浸泡7 min，无菌水冲洗5遍，最后用无菌纱布吸收掉叶片上的多余水分。将叶片剪切成3 mm×5 mm大小后放入9 mol/L甘露醇溶液中预处理2 h。本试验采用酶解法在设定条件下对“红颜”草莓嫩叶进行原生质体的分离制备，酶液组成如表1所示。酶液使用0.1%的MES和0.5%的PVP溶解于CPW溶液配制而成，最终调节pH值为5.6。使用0.2μm滤膜过滤除菌后放入至50℃水浴锅中预热10 min，按照酶液与材料10∶1～20∶1的比例加入到已剪切好的叶片中。黑暗环境，在不同温度（28、29、30、31和32℃）条件下，分别以30、40、50、60和70 r/min不同震摇转速及静置方式下进行酶解反应。