《表1 所用基因及引物信息》

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《四种化合物诱导马铃薯抗晚疫病的效果及其相关防御基因表达分析》


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根据KK快速提取植物RNA试剂盒说明书提取上述各处理的马铃薯RNA,用反转录c DNA试剂盒反转录合成c DNA,将其浓度稀释至50 ng/μL,作为实时荧光定量PCR反应的模板。基于马铃薯防御基因PR1、PPO和POD设计相应引物,以马铃薯肌动蛋白基因β-actin作为内参基因,所有引物均由北京睿博兴科生物技术有限公司合成(表1)。使用荧光定量PCR试剂盒RR0820A进行PCR扩增,20μL反应体系:TB Green Premix Ex Taq II(Tli RNase H Plus)(2×)10μL、10μmol/L上下游引物各0.8μL、ROX Reference Dye II(50×)0.4μL、c DNA 2μL、灭菌水6μL。反应程序:95℃预变性30 s;95℃变性5 s,60℃退火30 s,72℃延伸20 s,共40个循环。采用2-ΔΔCt法计算各基因的相对表达量。每个处理3次生物学重复,3次技术重复。