《表1 用于系统发育分析的基因序列》

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《芍药黑斑病病原菌鉴定及其对杀菌剂敏感性分析》

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利用CTAB法提取菌丝的基因组DNA。使用通用引物对ITS4和ITS5（White et al.，1990）、EPG-specific和EPG-3b引物对、OPA2-1L和OPA2-1R引物对（Peever et al.，2005）、Alt-for和Alt-rev引物对（Hong et al.，2005）分别对真菌DNA的核糖体基因转录间隔区（r DNA-ITS）、多聚半乳糖醛酸内切酶基因endo PG、基因组匿名区序列OPA2-1、主过敏原基因Alt a 1进行扩增。PCR扩增体系：10×PCR buffer 2μL，Mg2+(25 mmol·L-1）1.2μL，DNA 100～300 ng，上下游引物（10μmol·L-1）各1μL，d NTPs（2.5 mmol·L-1）0.5μL，Taq DNA聚合酶（5 U·μL-1)0.5μL，无菌水补齐到20μL。PCR反应程序为：94℃预变性5 min；95℃变性30 s，55℃或57℃复性30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸5 min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，通过胶回收、TA载体克隆，送往上海生工进行序列测定。序列交NCBI数据库进行Blast N同源性比对，并登录Gen Bank（表1）。将确定种的序列（表1）与目标序列进行比对，根据Chen等（2016）中的方法进行多基因联合分析，利用软件Phylo Suite(Zhang et al.，2020）构建贝叶斯进化树。