《表1 荧光定量PCR引物》

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《苹果MLP家族基因鉴定及非生物胁迫响应分析》

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EASYspin植物RNA快速提取试剂盒（YPHBIO，Beijing，China）提取RNA，琼脂糖凝胶电泳检测，Nano Drop 2000(Gene Company Limited，Hong Kong，China）仪器测定RNA浓度。反转录试剂盒（Ta Ka Ra，Dalian，China）获得c DNA，灭菌双蒸水将c DNA稀释10倍。利用NCBI-BLAST(https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）在线网址设计特异性引物（表1），因物种间串联重复现象的发生，设计引物时发现Md MLP5和Md MLP13、Md MLP8和10引物相同，导致无法通过q RT-PCR确定其基因表达水平的差异。Light Cycler?480实时荧光定量PCR仪（Roche，Shanghai，China）进行q RT-PCR试验，Md Actin作为标准化基因表达水平的内部对照。每个样品进行3次生物学重复。用Graph Pad.Prism8.0软件计算基因相对表达水平，MEV对Md MLP家族基因的表达模式进行分析。