《表1 荧光定量PCR引物》

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《陆地棉TLP基因家族的全基因组鉴定及表达分析》

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各个时间点样品RNA提取参照RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒说明书，利用Fast Quant cDNA第一链合成试剂盒反转录合成cDNA，实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）采用Super Real Pre Mix Plus（SYBR Green）试剂盒，以上试剂盒均购自TIANGEN公司。反应体系（20μL）:2×SuperReal PreMix Plus10μL，上下游引物各0.6μL，cDNA 1μL，50×ROX Reference Dye 0.4μL，RNase-free ddH2O 7.4μL。两步法反应程序:94℃15 min；95℃10 s，60℃32 s，40个循环。利用Primer Premier 5.0软件设计候选基因的qRT-PCR特异引物（表1），以陆地棉GhUBQ7（DQ116441）作为内参基因。在ABI 7500实时荧光定量PCR仪中进行，采用2-ΔΔCT计算候选基因相对表达量[18]，采用Origin 8软件对候选基因的定量结果进行柱形图分析。