《表1 荧光定量PCR引物》

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《柑橘属SAUR基因家族的全基因组鉴定及表达分析》


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注:*表示引物采用Primer premier 5.0软件设计而成,其余引物来自于qPrimerDB-qPCR Primer Database。

用植物总RNA提取试剂盒(DP432)(天根生化科技(北京)有限公司,中国)提取总RNA。cDNA合成以总RNA为模板,采用Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermo Scientific,美国)完成。CclSAUR2和CclSAUR10基因的引物用Primer premier 5.0软件设计,其余荧光定量PCR引物从qPrimerDB-qPCR Primer Database(https://biodb.swu.edu.cn/qprimerdb/)下载(表1)。qRT-PCR反应体积为10μL,以稀释10倍的cDNA为模板,采用iTaqTM Universal SYBR?Green Supermix(BioRad,美国)试剂,用CFX96 TouchTM荧光定量PCR检测系统(BioRad,USA)检测基因的表达水平。qRT-PCR反应程序为:95℃预变性30 s,之后95℃变性15 s,58℃退火30 s,循环40次。用来源于柑橘的GAPDH作为内参基因,每个样品重复3次。采用2-△△CT法计算基因相对表达量。