《表1 体外Pig-a基因突变检测方法验证用化合物》

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《基于L5178Y细胞的Pig-a基因突变试验方法学研究》

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非S9代谢活化条件：细胞达对数生长期后，更换R0培养基（含有1%青链霉素混合液，0.2 mg·mL-1丙酮酸钠的RPMI 1640），并添加不同浓度的AAI、NDEA、MMS、MMC、CP、COL、糖精和乙烯利，将细胞密度调整为5×105 mL-1于10 mL培养基。细胞与受试物在37℃、5%CO2条件下共同作用24 h后收集细胞并计数，计数结果用于计算RPD。以RPD最低值不小于50%时的浓度为最高给药浓度，并用DMSO倍比稀释，共4～6个浓度用于正式试验（表1）。正式试验细胞给药处理24 h后计数细胞，细胞经离心（1 000 r·min-1，5 min，室温）后以PBS洗涤2次，将细胞重悬于10 mL完全培养基R10并维持密度为1.0×106～2.0×106 mL-1表达8 d。