《表1 引物序列：非洲猪瘟病毒p35蛋白作为诊断抗原的抗原性比较》

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《非洲猪瘟病毒p35蛋白作为诊断抗原的抗原性比较》

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为了获得ASFV p30重组杆状病毒。以合成的带有His表达标签的ASFV p30基因为模板进行PCR扩增，反应条件为：95℃5 min；95℃1 min，48℃3 0 s，72℃1.5 min，34个循环；72℃10 min。将目的DNA经Eco RⅠ和XbaⅠ双酶切后插入到p Fast BacTM载体，得到p Fast Bac-p30重组质粒，委托擎科生物科技有限公司测序验证后，将p Fast Bac-p30重组质粒转化至DH10BacTM感受态细胞，得到重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-p30，进一步用鉴定引物M13F和M13R鉴定。将鉴定正确的重组杆粒DNA提纯后在Cellfectin?ⅡReagent的介导下，转染生长状态最佳的Sf9细胞，设正常细胞作为对照。27℃培养72 h，待出现明显细胞病变后，收获上清用蚀斑试验测定重组杆状病毒的效价。再次进行病毒传代扩增，获得病毒滴度较高的P3代Bac-p30重组杆状病毒。