《表1 实验仪器信息:大麦S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因HvSAMS2对非生物胁迫响应的表达分析》

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《大麦S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因HvSAMS2对非生物胁迫响应的表达分析》


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下划线指示酶切位点

在NCBI数据库中检索得到大麦Hv SAMS2(Gen‐Bank No.AM039894.1)的m RNA序列全长信息,利用Oligo 7.0软件设计特异引物SAMS-F/R (表1)。以大麦c DNA为模板扩增Hv SAMS2编码序列。PCR扩增体系(20μL):c DNA模板(100 ng/μL)2μL、引物SAMS-F/R (10μmol/L)各1μL、2×Pfu PCR Mas‐ter Mix 10μL、dd H2O 6μL。PCR反应程序:94℃预变性3 min;94℃变性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸2 min,30个循环;72℃终延伸5 min。PCR产物回收后连接p MD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆,送北京奥科鼎盛生物科技有限公司测序。