《表2 ISSR-PCR扩增正交设计极差分析》

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《无花果ISSR-PCR反应体系的建立与优化》


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注:不同字母代表0.05水平的差异显著性

用极差分析方法对电泳条带的评分结果进行分析(图2)。参数k代表每个因素在某一水平下评分结果的平均值,参数R代表某一因素在不同水平间平均值的极差。R值能反映出5个因素对反应体系的影响情况,R值越大表明该因素对反映结果的影响越大,反之则越小。5个因素对无花果ISSR-PCR反应的影响程度Easy Taq Buffer(Mg2+)>引物>Taq聚合酶>DNA>d NTPs (表2),这与方差分析得出的结果一致。ki表示五种因素中的不同水平对反应体系的影响,值越高,该水平下PCR反应结果越好。Taq聚合酶在水平1下k值最高,结合显著性分析结果,k1,k2,k3,k4之间有显著性差异,因此确定水平1为Taq聚合酶的最适浓度。以此方法类推,确定d NTPs、DNA、引物、Easy Taq Buffer (Mg2+)的最佳浓度水平,最后得出最优组合为:Taq聚合酶1U,d NTPs0.16mmol/L,DNA 30 ng/25μL,引物0.4μmol/L,Easy Taq Buffer(Mg2+)3.5μL/25μL。