《表3 正交设计方差分析：藜芦ISSR-PCR反应体系的建立与优化》

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《藜芦ISSR-PCR反应体系的建立与优化》

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对评分结果进行方差分析（表3），可知模板DNA、Taq DNA聚合酶、引物、dNTP、Mg2+对PCR反应的p值均小于0.01，即各因素对PCR反应的影响均达到极显著水平。结合极差分析，结果显示，对藜芦ISSR-PCR反应影响最为明显的因素为Taq DNA聚合酶。Duncan因素内多重比较（表4）显示，Taq DNA聚合酶浓度水平1、2、3、4之间均有显著性差异，当Taq DNA酶浓度为2 U时评分结果均值最大。因此，2 U/20μL为藜芦ISSR-PCR反应中Taq DNA聚合酶的最佳浓度。引物评分结果均值随引物浓度的增大先增大后减小。Duncan因素内多重比较显示，引物浓度水平3、4之间无显著性差异，当引物浓度为0.30μmol/L时分析结果值最高。因此，即引物的最佳浓度为0.3μmol/L。模板DNA浓度对试验结果的影响次于引物。水平1、3、4之间无显著性差异，水平2与其余水平间差异显著。当模板DNA浓度为30 ng时评分结果均值最大。因此，选择30 ng为模板DNA的最佳浓度。Mg2+浓度水平1、2、3、4之间均有显著性差异。当Mg2+浓度为1.0 mmol/L时评分结果均值最大。因此，选择1.0 mmol/L为Mg2+浓度的最佳浓度。dNTP浓度水平1、2、3、4之间均有显著性差异。当dNTP浓度为0.2 mmol/L时评分结果均值最大。因此，选择0.2 mmol/L为d NTP浓度的最佳浓度。