《表1 银缕梅ISSR-PCR反应体系正交试验设计》

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《珍稀濒危植物银缕梅ISSR-PCR反应体系建立及优化》

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注:DNA 20 ng/μL；引物10μmol/L；d NTPs 2.5 mmol/L；Mg2+25 mmol/L；Taq酶5 U/μLNote:DNA 20 ng/μL；Primer 10μmol/L；dN TPs 2.5 mmol/L；Mg2+25 mmol/L；Taq Polymerase 5 U/μL

对引物845进行5因素4梯度的正交试验（图2），发现16个处理中只有处理5和9没有扩增出条带。对有扩增条带的进行进一步比较，发现处理6条带最清晰、多态性较好，故选取处理6进行单因子试验。由表1可知，处理6的25μL反应体系中，DNA2.50μL（20 ng/μL），Taq酶0.10μL（5 U/μL），引物1.00μL（10μmol/L），d NTPs 1.50μL（2.5 mmol/L），Mg2+3.00μL（25 mmol/L）。根据正交试验结果，设计出单因子试验浓度梯度（表2）。