《表3 中国沙棘ISSR-PCR反应体系的正交设计因素水平》

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《中国沙棘ISSR-PCR反应体系的建立和优化》

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注:表中各因素变量单位为μL

经过初步筛选，选用UBC857（5'-ACACACAC ACACACACYG-3'）正交试验所用引物。ISSR-PCR反应总体积为20.0μL，为了确定ISSR-PCR反应体系中基因组DNA模板、dNTPs、Primer引物、Mg2+Cl、Taq DNA聚合酶5个因素的最适反应浓度，依据TAKARA Taq DNA聚合酶使用说明书，设计了5因素4水平的正交试验（表3），然后通过对正交试验设计表中16个反应体系进行测试（表4）。将16个反应体系的结果按照条带数量，背景值和清晰度分别评分，计算出平均值，重复三次得出平均值，输入正交实验助手软件（IatinⅡv3.1）分析出最佳反应体系。再以该正交实验体系为基础，通过单因素优化实验筛选出最佳的ISSR-PCR反应体系。