《表2 烟草ISSR-PCR反应体系优化因素与水平》

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《烟草ISSR-PCR反应体系优化的初实验》

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以烟草种质的DNA作为模板，将引物浓度、Mg2+浓度、d NTP浓度、退火温度4个影响因素设置5个水平（见表2），采用单因素设计对烟草IS-SR-PCR反应体系进行优化，当进行某一因素水平实验的时候，其他因素都固定在第3个水平，进而筛选出每一个因素的最适条件，反应体系的总体积为20μL，每个处理的10×buffer用量均为2μL，Taq酶用量DNA聚合酶均为4 U（0.8μL），DNA模板用量均为1μL（50 ng/μL），用dd H2O补足到总体积20μL。