《表5 ISSR-PCR反应体系正交试验的各个因素及水平》

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《鳞尾木ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化》

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用2×UniqueTMTaq Plus Master Mix （with Dye）对100条通用引物进行初步筛选，选用引物U811 （GAG AGA GAG AGA GAG AC）来做正交试验（L16(45）)，对研究的5个因素（Mg2+，Taq DNA聚合酶，d NTPs，引物，模板DNA）设定4个梯度（表5；表6），此外每个反应体系还含有2.0μL的10×PCR Buffer，其余的用dd H2O补够20μL，每个处理设置3次重复（谢伟玲，2016）。PCR扩增产物用浓度为1.5%～2%的琼脂糖（加入3μL左右的Gelred核酸染料）凝胶电泳45 min，UVP凝胶成像系统拍照保存。