《表7 野生欧洲李ISSR-PCR反应体系的正交试验设计》

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《新疆野生欧洲李ISSR-PCR反应体系的建立与优化》

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参照孙琪（2015）的研究方法，采用L16（45）正交试验设计对PCR反应影响较大的5个因素的用量（5 U Taq DNA聚合酶，10 mmol/L引物，2.5 mmol/L d NTPs，10×Buffer (含Mg2+），50 ng/μL DNA模板)进行5因素4水平筛选（表6；表7）。本试验以UBC817为扩增引物，反应总体系为20μL，最后用双蒸水补足至20μL，每个处理设置3次重复试验。预设PCR扩增反应程序为：94℃预变性1 min，94℃变性45 s，50℃退火1 min，72℃延伸2 min，35次循环，72℃延伸7 min，最后4℃保存（孙琪，2015）。采用2%的琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行检测，并在凝胶成像仪上拍照观察。