《表3 ISSR-PCR L16 (45) 正交试验设计》

《表3 ISSR-PCR L16 (45) 正交试验设计》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《蚕豆ISSR反应体系的建立与优化》


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为确定ISSR-PCR反应体系中各反应因素最佳水平,采用五因素四水平正交设计L16(45)(表3) 。正交设计中的16个试验处理各重复3次。在伯乐S1000TMThermal cycler型PCR仪上进行扩增,扩增反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,共扩增35个循环;72℃延伸10 min,扩增完毕,4℃保存待后续检测,在扩增反应混合物中加入Loading Buffer 5μL,混和均匀。取6μL点入8%非变性聚丙烯酰胺凝胶中,于1×TBE电泳缓冲液中、150 V电场下电泳120 min,银染凝胶,拍照并记录结果。