《表3 各组质粒荧光素酶活性》

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《冠心病相关SLC22A3基因中新发现负性调控序列的性质与功能鉴定》

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注：F=107.000，P=0.000

为检测2个调控元件的负性调控作用是否受到位置的局限，实验所用载体的报告基因为荧光素酶报告基因，受SV40启动子及增强子的启动及调控。将2个调控元件克隆至p GL3-Control载体后，瞬时转染人胚肾HEK293T细胞，24 h后检测荧光素酶活性。若插入的2个调控元件为增强子阻断绝缘子，仅在插入位点为增强子与启动子之间时，降低报告基因LUC的表达，表现为荧光素酶活性减低，而当插入位点为增强子下游时则不会降低报告基因LUC的表达，表现为荧光素酶活性与空白对照无差异；若插入的2个调控元件为沉默子，在2个插入位点均能发挥负性调控作用。实验设置空白对照pGL3-Control，并与内参质粒pRL-SV40共转染。结果显示（表3、表4、图6)，4组重组质粒pGL3-con-SLCi7-447X(2.353±0.323）、pGL3-con-SLCi7-447S(3.046±0.415）、pGL3-con-SLCi7-460X(3.016±0.119）、pGL3-con-SLCi7-460S(3.833±0.282）相较于空白对照pGL3-Control(7.423±0.230），荧光素酶活性均明显降低（P<0.05），说明2个调控元件不仅仅是在位于启动子与增强子之间时才具备负性调控能力，其负性调控作用不受位置的限制，发挥沉默子调控功能。