《表1 qPCR引物信息：乳腺炎对牛奶外泌体功能的影响：基于乳腺上皮细胞的观察》

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《乳腺炎对牛奶外泌体功能的影响：基于乳腺上皮细胞的观察》

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将MECs接种于6孔板中（6×105个/孔），加入外泌体（1μg/mL）处理24 h后，用PBS洗涤3次，采用Trizol法提取细胞总RNA；取1μg m RNA，采用PrimeScript cDNA合成试剂盒（TaKaRa公司，日本）逆转录合成cDNA，操作方法按说明书进行。根据GenBank上发表的牛血清白细胞介素8(interleukin-8，IL-8）、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）基因序列，采用Primer Blast在线软件（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/）设计跨内含子PCR引物（表1）。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，q PCR）反应总体系为20μL：上下游引物各0.6μL、SYBR q PCR混合物10μL、c DNA 2μL、dd H2O 6.8μL。q PCR反应程序为：95℃预变性60 s；95℃变性15 s，60℃退火60 s，40个循环。以参考基因RPL19和PGK1的CT值的几何平均值为参照，采用2-△△CT法计算目的基因的相对表达量。