《表1 qRT-PCR引物列表》

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《溃疡病菌侵染早期柑橘细胞程序性死亡的响应特征及机制》


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利用Aidlab公司的试剂盒EASY Spin Plant RNA Kit提取植物总RNA,取0.5~1.0μg RNA用Fermentas公司的反转录试剂盒RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行相关基因相对表达水平分析,以β-actin为内参基因。用NCBI在线软件Primer-BLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)设计基因特异性引物(表1)。用Bio-Rad公司的CFX96TM Real-Time System进行检测,荧光染料选用Bio-Rad公司的iTaqTM universal SYBR Green Supermix。PCR程序采用3步法:95℃3 min,然后95℃15 s,56℃30 s,72℃30 s(共40个循环)。用Bio-Rad公司的CFX Manager 3.1软件对数据进行分析;用熔解曲线对引物特异性进行判断。