《表1 体外转录的引物设计》

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《中华蜜蜂气味受体AcerOr2基因最佳干扰片段的筛选》

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以NCBI上AcerOr2(JN792581）和GFP(JQ064510.1）基因c D-NA编码区（ORF）为模板，使用Primer Premier 6.0设计目的基因AcerOr2的3个不同片段大小的引物和内参GFP的1个片段引物（表1），并在引物5′端添加T7启动子序列（TAATACGACTCACTATAGGG）。以克隆测序后确认含有目的基因AcerOr2部分序列的质粒DNA作为模板进行PCR扩增（94℃预变性3 min；94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸45 s，35个循环；72℃延伸10 min）。使用WizardR SV Gel and PCR Clean-Up System试剂盒（Promega）对PCR产物进行纯化，并对纯化后的PCR产物进行定量，使其满足体外合成dsRNA的量。根据T7RiboMAXTM Express RNAi System试剂盒操作手册，使用T7 RNA聚合酶将上述回收的DNA产物体外合成dsRNA，浓度测定后，-80℃保存备用。